群勃龙，常被作为动物生长促剂用于动物养殖。但群勃龙会以原形或中间代谢产物在动物的细胞、组织或器官中蓄积，造成残留。一旦被人食用后，可产生一系列激素样作用，如破坏人机体的激素平衡、干扰人的内分泌功能、影响生育能力、并具有潜在致癌性、发育毒性。2020年，群勃龙已被列入食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单。但因其很强的促蛋白合成作用，少数生产企业及饲养者、经营者会在牛养殖过程中滥用或非法使用作为同化激素类添加剂的群勃龙以促进牛的生长和牛奶生产，常常造成群勃龙在牛肉、牛奶等动物性源食品中残留量超标，危害人体健康。因此，对食品中群勃龙残留的检测至关重要。然而群勃龙残留检测样品基质复杂、干扰物质多、浓度低，对方法的灵敏度、准确度、特异性等要求高。液相色谱－串联质谱优秀的灵敏度、准确度可以满足检测需求，能够在高背景或干扰物存在的情况下完成对群勃龙定量检测。因此，本文参考《GB 31658.14-2021 食品安全国家标准 动物性食品中α-群勃龙和β-群勃龙残留量的测定 液相色谱－串联质谱法》，建立了测定牛奶中群勃龙类兽药含量的快速且高灵敏度的检测方法。

关键词：LC-MS/MS、食品、牛奶、α-群勃龙、β-群勃龙、兽残、GB 31658.14-2021

实验部分

仪器

表1 液相色谱串联三重四级杆质谱仪

表2 液相色谱串联三重四级杆质谱仪检测参数

试剂及标准品

      试剂：质谱级甲酸(CNW)、质谱级乙酸铵（CNW）、色谱级甲醇（Merck）、色谱纯叔丁基甲醚（CNW）、色谱纯乙腈（Merck）；乙酸钠、乙酸、氨水（国药集团）、β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶溶液（CNW）；

      纯水：18.2 MΩ·cm去离子水（25℃）；

      标准品：α-群勃龙、β-群勃龙（坛墨质检）。 

样品前处理

      样品前处理方法：参考《GB 31658.14-2021》。

      均质后的牛奶样品加入乙酸钠溶液，涡旋混匀后调节pH，使用β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶溶液酶解，冷却后加入乙腈和叔丁基甲醚，涡旋混匀，震荡，离心，重复提取两次。取上层液合并于50℃水浴氮吹干并用甲醇水溶解，加入正己烷震荡离心提取两次。取下层水相，氮吹，甲醇水溶解残余物后，过HLB固相萃取柱，依次用不同配比的甲醇-氨水溶液和水淋洗，抽干，淋洗液过氨基固相萃取柱后洗脱。收集的洗脱液于50℃水浴氮吹干，用80%甲醇溶液溶解残余物，超声，涡旋，过滤。

线性和检出限

图1空白溶剂MRM叠加色谱图

图2 浓度为2ug/kg 2种群勃龙类化合物叠加色谱图

表3 2种群勃龙类化合物检出限和定量限

样品测试

      按照2.3中样品制备方法处理牛奶样品，平行测定3次，批处理结果如下图所示，未发现牛奶有群勃龙类化合物残留。

图8牛奶样品批处理结果图

图9 牛奶样品MRM叠加色谱图

结语

      牛奶样品经HLB、氨基固相萃取柱等前处理过程，使用三重四极杆液质联用系统对牛奶中2种群勃龙类化合物进行测定。本文考察了方法的线性、精密度、灵敏度、回收率和实际样品测试等，结果表明：2种群勃龙类化合物在检测范围内线性良好，相关系数均在0.995以上；对不同浓度的混合标准溶液各平行测定6次，方法精密度在5%以内，仪器精密度良好。对于样品加标前处理后上机分析，加标浓度30ug/kg时，α-群勃龙回收率为111.67%，β-群勃龙回收率为75.11%，回收率均处于60%~120%之间，符合标准。α-群勃龙检出限为0.15ug/kg，测定下限为0.51 ug/kg；β-群勃龙检出限为0.06ug/kg，测定下限为0.20 ug/kg；因此高灵敏、高抗污染能力的LCMS/MS系统，可用于牛奶样品中群勃龙类化合物残留含量进行快速、灵敏、准确的定量检测。

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• 附录

设备与耗材方案

一、EXPEC 5210 配置详情

二、标准品

• 液相色谱-三重四极杆质谱联用仪

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